L’incubation prolongée et la sous-culture extensive n’accroissent pas la récupération de micro-organismes cliniquement significatifs à partir de cultures sanguines automatisées standard

Un protocole d’hémoculture étendu, comprenant une incubation prolongée des cultures, a donné des résultats cliniquement significatifs pour des patients présumés atteints d’endocardite. Vingt-quatre organismes Haemophilus, Actinobacillus, Cardiobacterium, Eikenella et Kingella, HACEK, ont été la même période de temps Des méthodes spécialisées et des temps d’incubation non prolongés sont recommandés pour la récupération des agents fastidieux de la septicémie

L’endocardite infectieuse de l’EI, bien que relativement rare, n’a pas diminué de prévalence au fil du temps L’incidence aux États-Unis a augmenté de cas par patient-années dans le s à autant de cas par patient-années dans le s Si Le diagnostic de l’EI nécessite l’obtention d’au moins une série d’échantillons de sang pour la culture avant le début de l’antibiothérapie Malgré les progrès des procédures et des milieux d’hémoculture, ~%% -% des cas d’IE sont des cultures Les organismes Haemophilus, Actinobacillus, Cardiobacterium, Eikenella et Kingella sont traditionnellement reconnus comme des agents étiologiques communs aux endocardites à culture négative. Cependant, d’autres organismes plus exigeants peuvent aussi causer une endocardite à culture négative, notamment: bactéries Coxiella burnetii, Mycoplasma species et Chlamydia, Brucella, Legionella, Bartonella, Tropheryma whipplei, f Ungi, mycobactéries et streptocoques nutritionnellement variants Abiotrophia et Granulicatella species La croissance de certains de ces organismes nécessite des milieux spécialisés ou une culture cellulaire et peut nécessiter jusqu’à plusieurs semaines. La plupart des laboratoires de microbiologie n’ont pas de protocoles de culture efficaces pour détecter les organismes exigeants. rapport a montré que le temps d’incubation prolongée n’a pas réussi à augmenter le rendement des bactéries fastidieuses, les médecins continuent de demander que les laboratoires « retiennent » les hémocultures pendant plus longtemps lorsque des agents inhabituels sont soupçonnés Une source recommande l’incubation de ces hémocultures pendant des semaines Après une éclosion de bactériémies à Legionella et d’infections des plaies sternales, le Stanford University Hospital et le Clinical Clinical Microbiology Laboratory de Stanford, en Californie, ont établi un protocole complet d’hémoculture pour maximiser l’isolement des organismes exigeants. protocole a été commandé wid ely au Stanford University Hospital et au Clinics Clinical Microbiology Laboratory chaque fois qu’un diagnostic d’endocardite ou de fièvre d’origine inconnue était pris en compte; Nous avons évalué rétrospectivement l’efficacité de ce protocole étendu pour la récupération de microorganismes exigeants. Matériel et méthodes Pour le tableau de protocole spécial, les phlébotomistes ont prélevé du sang dans une seringue -mL à partir de sites de ponction veineuse, différents sites périphériques; des échantillons ont été prélevés les uns après les autres. Dix mL de sang de chaque seringue ont été injectés dans une bouteille de culture sanguine aérobie Bactec Plus Aerobic; BD Microbiology Systems, et mL a été injecté dans une bouteille anaérobie Bactec Plus Anaerobic; BD Microbiology Systems En plus d’être incubés pendant plusieurs jours sur les systèmes Bactec BD Microbiology Systems, après et jours d’incubation, des aliquotes de toutes les bouteilles aérobies et anaérobies, respectivement, ont été sous-cultivées sur de l’agar extrait de levure de charbon de bois tamponné BCYE; incubées en aérobie pendant plusieurs jours, plaques de gélose au chocolat incubées en% -% de CO pendant plusieurs jours, plaque de gélose au sang de lapin incubée en% -% de CO pendant plusieurs jours, plaque de gélose Sabouraud dextrose incubée pendant plusieurs semaines et gélose Lowenstein-Jensen incubée en% -% CO pour la première semaine et en aérobiose pendant des semaines supplémentaires Les supports non fabriqués à l’interne ont été achetés auprès de BD Microbiology Systems Des contrôles de qualité ont été effectués sur les supports, et aucun échec n’a été constaté

de chaque bouteille a été examiné après jours et jours Le protocole de l’endocardite a également nécessité le volume des tubes de lysiscentrifugation, mL; Système isolateur [distribué à l’origine par Dupont, et distribué par la suite par Wampole]; Les tubes ont été centrifugés, les surnageants ont été jetés et les sédiments ont été inoculés à BCYE, au sang de lapin, au dextrose de Sabouraud, au chocolat et à la gélose au sang de Brucella supplémentée. Le volume total de sang prélevé chez chaque patient pour ce protocole était de ~ mL.Pour tous les autres patients, les hémocultures standard incluaient des veinoplasties séparées de mL chaque fois 10 ml de sang. de la première ponction veineuse a été injecté dans une bouteille de Bactec aérobie, et mL a été injecté dans une bouteille de Bactec anaérobie; Les deux aliquotes -mL de la deuxième ponction veineuse ont été injectés dans des flacons aérobies. Les flacons ont été incubés sur l’instrument Bactec pendant plusieurs jours. Le protocole spécial d’endocardite a été commandé chez les patients, chez les patients et chez les patients. premiers jours d’incubation Dans, le protocole de jour standard ordonné pour tous les autres patients à Stanford University Hospital et Clinics a récupéré Haemophilus influenzae isolats, isolats Capnocytophaga, et Bartonella isolat In, le protocole standard récupéré Haemophilus parainfluenzae isolat, H isolenzae isolats, Actinobacillus actinomycetemcomitans isoler , Isolat de Capnocytophaga, isolat de Haemophilus aphrophilus et isolat d’Eikenella corrodens% de tous les résultats positifs cliniquement significatifs Dans, le protocole standard a donné des isolats de H influenzae, Haemophilus parahaemolyticus, H parainfluenzae, A actinomycetemcomitans, et Bartonell un isolat% de tous les résultats positifs cliniquement significatifs Au cours de l’évaluation,% de tous les résultats d’hémocultures positifs ont été détectés au quatrième jour d’incubation sur le système Bactec Bien que seuls% des isolats d’Haemophilus aient été détectés par jour d’incubation, Quinze isolats récupérés chez les patients du protocole spécial d’endocardite n’auraient pas été détectés par nos méthodes d’hémoculture standard; les staphylocoques à coagulase négative, les diphtheroïdes à bâtonnets gram-positifs corynéformes et les espèces de Bacillus, qui ont été récupérés après & gt; Les isolats du complexe de Mycobacterium avium se sont développés sur les pentes de Lowenstein-Jensen inoculées à partir de tubes isolants prélevés chez un patient atteint du SIDA; Les cultures ont été obtenues à plusieurs mois d’intervalle. Une espèce de Legionella a également été récupérée à partir de tubes isolants et à partir de cultures sanguines, elle a été cultivée sur des sous-cultures d’agar BCYE seulement. résultats positifs de la bouteille, espèces isolées, et temps de positivité] à partir de ~, de telles cultures reçues chaque année pendant la période de – [, -] Ces résultats ne peuvent être directement comparés aux résultats pour le petit nombre de spécimens Nous avons pensé que les organismes exigeants récupérés reflètent ce que l’on attendrait d’une institution académique de taille adulte. Chaque demande spéciale d’endocardite coûtait environ $ en matériel et en temps de technologue, et les résultats de culture bactérienne de routine n’étaient pas disponibles. Jusqu’à plusieurs jours après la collecte des échantillons. Les rapports sur les cultures mycobactériennes et fongiques Les isolats cliniquement significatifs ont été récupérés à partir des cultures d’endocardite, au prix de $, bien que des agents exigeants provenant principalement du groupe HACEK aient été isolés de cultures sanguines conventionnelles commandées pour d’autres patients pendant la période d’étude. Nouvelles méthodes de manipulation des échantillons, telles que la culture de couches leucocytaires à partir de tubes héparinés, l’utilisation de milieux de bouillon spécialement formulés pour les instruments automatisés ou l’utilisation de la méthode de lyse-centrifugation pour la quantification des unités circulantes formant des colonies Les légionelles ne parviennent pas à se répliquer dans un milieu de bouillon hémoculture standard et sont mieux récupérées à l’aide d’un tube isolant et inoculant le sédiment sur des plaques de gélose BCYE. Les champignons filamenteux peuvent survivre et se multiplier dans les milieux automatisés. bouteilles de système d’hémoculture, mais les résultats sont rarement signalés comme positifs avec l’utilisation de cette instrument Les moisissures sont mieux détectées en utilisant soit des milieux mycologiques spéciaux développés pour l’instrument d’hémoculture automatisé ou le système Isolator [, -]

Tableau View largeTélécharger la lameRecommandations pour la détection des agents de septicémie ou d’endocardite non récupérés par les hémocultures de routineTable Agrandir la photoTéléchargeRecommandations pour la détection d’agents de septicémie ou d’endocardite non récupérés par des hémocultures de routineBien qu’aucune espèce de Brucella n’ait été rencontrée pendant la période d’évaluation, nous avons récupéré Brucella isolats de patients après ⩽ jours d’incubation Des discussions approfondies sur le traitement des espèces de Brucella dans les hémocultures ont été publiées et ont conclu que les temps standard d’inoculation sont suffisants Les expériences cliniques des autres reflètent également nos découvertes. Les pratiques de culture utilisées dans les institutions académiques pour la culture d’organismes exigeants ont révélé que les institutions «conservent» les bouteilles pendant des jours, et que celles-ci effectuent des subcultures aveugles JM Miller, communication personnelle de ClinMicroNet, Avec & gt; années d’expérience cumulative rapportées par les répondants, représentant des centaines de milliers d’hémocultures, seuls les isolats significatifs ont été récupérés après incubation prolongée: isoler chacune des espèces Histoplasma, Propionibacterium acnes, viridans Streptococcus species, et Cardiobacterium hominisLe Stanford University Hospital and Clinics Clinical Microbiology Laboratory interrompu le protocole «endocardite» et nécessite maintenant une consultation obligatoire avec des spécialistes des maladies infectieuses lorsque des tests spéciaux sont nécessaires pour la détection des espèces de Legionella, Bartonella, Malassezia furfur et d’autres organismes exigeants qui ne poussent pas dans le bouillon couramment utilisé sous-cultures aveugles peut être utile pour les patients avec des résultats de culture de levure positifs précédents, mais qui reçoivent actuellement des antifongiques. La détection d’organismes supplémentaires peut nécessiter des tests diagnostiques qui ne sont pas disponibles dans notre laboratoire, comme des études sérologiques, une culture unique pour Lep Espèces de tospira ou de Mycoplasma, amplification d’acide nucléique, ou examen histologique d’échantillons de tissu valvulaire enlevé [,,,] Les résultats de cette étude, qui ne pourraient pas être répétés aujourd’hui, compte tenu des contraintes de personnel et de laboratoire. l’incubation des hémocultures au-delà du protocole de jour standard est rarement productive

Remerciements

Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits