Entéropathogènes chez les adultes souffrant de diarrhée et de sujets témoins sains: A -Année prospective dans une clinique suédoise pour les maladies infectieuses

Une étude prospective a été menée pour identifier les entéropathogènes chez les adultes atteints de diarrhée n = et chez les sujets sains témoins n = en utilisant des méthodes de laboratoire conventionnelles Les gènes du facteur de virulence des Escherichia coli diarrhéiques ont été détectés par réaction en chaîne par polymérase. % de sujets témoins Le taux d’isolement était de% pour les patients présentant des symptômes de & lt; semaine et pour les voyageurs; & gt; pathogène a été trouvé chez% des patients Les entéropathogènes les plus fréquents étaient Campylobacter% des patients, Clostridium difficile%, Escherichia coli entérotoxigène%, Salmonella%, Shigella%, Blastocystis hominis%, calicivirus%, rotavirus%, E coli entéro-agrégatif%, Aeromonas%, Giardia intestinalis%, Cryptosporidium% et astrovirus% Moins fréquemment isolées ≤% des patients étaient E. coli vérotoxigène, E coli entéropathogène, E coli entéro-invasive, Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar, microsporidies et adénovirus Cinquante pour cent des patients ont été hospitalisés, et% fluides intraveineux nécessaires La durée médiane de la diarrhée était de plusieurs jours Les caractéristiques cliniques n’étaient pas utiles pour prédire l’étiologie de la diarrhée

Les maladies diarrhéiques infectieuses constituent un grave problème dans le monde et sont responsables d’une morbidité et d’une mortalité considérables, en particulier dans les pays en développement. La diarrhée infectieuse reste également un problème important dans les pays industrialisés, mais l’évolution de la maladie est généralement faible. La perte économique due au coût des soins médicaux et à l’absence des patients du travail ou de l’école peut être considérable. Cependant, il a récemment été conclu que% des personnes d’une cohorte de la communauté britannique avaient une maladie intestinale infectieuse chaque année. les virus sont probablement la cause la plus fréquente de diarrhée infectieuse dans les cas domestiques, alors que les agents bactériens tels que Escherichia coli entérotoxinogène, Espèce Campylobacter et Salmonella comptent pour la plupart des infections contractées ailleurs. Environ un tiers des voyageurs des pays industrialisés au monde en développement diarrhée Connaissance o L’étiologie de la diarrhée est importante pour la surveillance épidémiologique mais aussi, dans de nombreux cas, pour un traitement correct Des rapports de nombreuses études sur la diarrhée infantile ont été publiés, décrivant les symptômes cliniques et les résultats microbiologiques Cependant, seuls quelques rapports similaires concernent l’étiologie de diarrhée infectieuse chez les adultes, en particulier dans les pays développés Dans les études suédoises menées dans les s, entéropathogènes potentiels ont été identifiés en% des enfants et% des adultes souffrant de gastro-entérite Les développements dans le domaine des techniques d’analyse moléculaire ont augmenté notre capacité à identifier les entéropathogènes potentiels dans les échantillons de selles et, ces dernières années, plusieurs nouveaux agents ont été de plus en plus reconnus en association avec les maladies diarrhéiques, notamment les E.coli diarrhéiques, les crypto-sporidies, les microsporidies et les calicivirus. beaucoup de ces micro-organismes ont acquis une importance accrue en tant que pathogènes dans im patients immunodéprimés Cependant, l’importance de ces pathogènes comme agents étiologiques dans les maladies diarrhéiques adultes est insuffisamment comprise. Le but de cette étude était de déterminer la vitesse à laquelle les entéropathogènes potentiels ont été isolés des échantillons de selles prélevés sur des adultes souffrant de diarrhée. un large panel de techniques de diagnostic, et de décrire les symptômes cliniques et les signes et l’évolution de la maladie

Patients et méthodes

Patients Les patients consécutifs qui ont été admis au Département des maladies infectieuses à l’hôpital universitaire de Huddinge Stockholm, en Suède, d’octobre à septembre à cause de la diarrhée ont été étudiés prospectivement. L’hôpital dessert une population de résidents du sud et de l’ouest de Stockholm. liés aux sentiments subjectifs des patients de la maladie due à la diarrhée Les patients âgés de & lt; Au total, les patients remplissaient les critères d’inclusion, mais le pourcentage était exclu parce qu’ils n’avaient pas de spécimens fécaux disponibles. Par conséquent, la population totale de l’étude comprenait des patients adultes ayant un besoin subjectif de soins médicaux dus à la diarrhée. ,% étaient hospitalisés

Caractéristiques de patients atteints de diarrhée et de sujets témoinsLes patients avaient ≥ un échantillon fécal obtenu pour des examens microbiologiques et ont répondu à un questionnaire sur l’occupation, les troubles gastro-intestinaux antérieurs, les traitements antibiotiques récents, les voyages, la date d’apparition de la diarrhée, et des symptômes et des signes Les spécimens fécaux ont été généralement obtenus après l’admission. Des analyses de laboratoire complètes, y compris des tests de recherche de bactéries, protozoaires et virus voir ci-dessous, ont été réalisées pour% des patients. Informations sur le traitement, la durée de la diarrhée et toutes les complications Les taux de réponse pour les différentes questions au suivi étaient de% -% sujets témoins Deux cent trois personnes n’ayant pas eu de diarrhée les jours précédents ont été recrutées au cours de l’étude parmi les gens pr Envoi de conseils et d’immunisations avant de se rendre dans des pays autres que la Suède Chaque spécimen fécal livré pour les examens microbiologiques et les parties applicables du questionnaire Les distributions d’âge et de sexe étaient similaires dans le groupe témoin et dans le tableau de groupe de patients Bactériologie Les spécimens fécaux étaient cultivés sur des milieux sélectifs Les bactéries Salmonella, Shigella, Yersinia, Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio et Campylobacter ont été identifiées par des méthodes de diagnostic de routine. Clostridium difficile a été détecté par croissance sur gélose à la cyclosérine-céfoxitine fructose additionnée de taurocholate de sodium. TechLab, Blacksburg, VA C difficile – les échantillons fécaux positifs étaient ceux dans lesquels des souches de cytotoxine B ou de C difficile toxigène ont été détectéesPour la présence dans les fèces de cytotoxine B identifiée par un test de cellules McCoy en combinaison avec un kit toxine / antitoxine détection d’entérotoxines E. coli ETEC coli, E.coli E coli entéropathogène, E. coli E coli entéro-invasif et E. coli E coli vérotoxigène, les échantillons fécaux ont été analysés par PCR comme suit: Après culture sur gélose MacConkey pendant une nuit, les bactéries de la série primaire ont été collectées et mises en On a préparé une matrice de ~ ADN de bactéries en faisant bouillir la suspension pendant min puis en la traitant avec de la protéinase K mg / mL à ° C pour une aliquote minAn correspondant à – des bactéries ont été utilisées dans le mélange PCR de mL contenant le tampon de réaction x, mmol de MgCl, U de AmpliTaq Perkin-Elmer, Branchburg, NJ, mmol de dNTP Pharmacia Biotech, Uppsala, Suède, et mmol de chaque amorce dans des tubes -mL L’amplification a été réalisée dans un moteur d’ADN PTC-MJ Research, Watertown, MA sous la conditions suivantes: dénaturation initiale à ° C pendant min; puis cycles de s à ° C, s à ° C et s à ° C, et une extension finale prolongée à ° C pendant min. Chaque échantillon a été amplifié par l’utilisation de tables de PCR parallèles.

Amplimers et amorces de PCR pour Escherichia coliTable diarrhéique View largeTélécharger slideAmplimers et amorces de PCR pour Escherichia coli diarrhéique Après amplification, mL de chaque échantillon a été analysé par gel d’agarose% d’électrophorèse La PCR a été considérée comme positive quand une bande ou des bandes de taille correcte ont été observées et aucune bande supplémentaire Des échantillons positifs pour eaeA ont été amplifiés avec le tableau des amorces bfpA Les souches E coli suivantes ont été incluses comme témoins dans chaque cycle de PCR: ETEC, ATCC eltB et estA; VTEC, ATCC vt et ATCC vt; EIEC / Shigella, ATCC ial; et EPEC, ATCC eaeA et bfpA La souche E.coli ATCC a été incluse comme contrôle négatif dans tous les essais. Les échantillons fécaux ont été désignés comme positifs pour divers organismes selon le tableau de définitions suivant: ETEC-positif, détection du gène d’entérotoxine thermolabile eltB et / ou un gène d’entérotoxine thermostable estA; EPEC-positif, détection d’un gène de fixation et d’effacement de eaeA E coli et d’un gène de pilus formant un faisceau de bfpA; EIEC / Shigella-positif, détection du locus associé à l’invasion ial; On a tenté d’isoler les bactéries correspondantes à partir d’échantillons positifs. Initialement, les colonies qui semblaient être des E. coli ont été prélevées sur les plaques de gélose MacConkey originales pour chaque échantillon et ont été testées séparément par PCR Si celles-ci étaient négatives, plusieurs pools d’au moins colonies ont été testés Si l’isolement était infructueux, les échantillons étaient toujours considérés positifs en raison de la sensibilité élevée du test PCR. Un typage sérologique des isolats VTEC a été réalisé avec E coli O antiserum Difco, L’antigène Flagellar de Detroit H a été détecté par identification du gène correspondant fliC par PCR Pour la détection de E. coli entéro-agrégat, les échantillons fécaux stockés à-° C ont été décongelés et mis en suspension dans du bouillon nutritif ~ g / mL. ° C pour h A partir de chaque échantillon, – des colonies de E coli ont été criblées par le test de formation de touffes, comme décrit par Albert et al Toutes les souches qui ont été analysés par PCR, comme décrit par Schmidt et al. En tant que témoins positifs pour les deux essais, des isolats cliniques d’E. coli entéroaggrégatif, vérifiés par le test HEp , ont été utilisés comme contrôle négatif. Les spécimens de selles ont été examinés par microscopie électronique à contraste négatif, comme décrit ailleurs Parasitologie Les échantillons fécaux ont été prélevés dans un fixateur SAF acétate de sodium-formol, et la concentration de sédimentation formaldéhyde acétate a été effectuée Ova et les parasites ont été détectés directement Les préparations de lames ont également été colorées pour les spores de microsporidies par la méthode de fluorescence Uvitex B Ciba-Geigy, Rueil-Malmaison, France , et la positivité des échantillons a été confirmée par des tests de microscopie. La coloration trichrome modifiée par Weber Méthodes statistiques Différences entre les taux d’isolement chez les patients et les sujets témoins, ainsi que dans les symptômes cliniques et les résultats entre les groupes de patients, ont été évalués par le test χ

Résultats

Répartition selon l’âge et le sexe L’âge médian du groupe de patients était de quatre ans et le groupe témoin était de quelques années. Il y avait une légère prédominance de femmes dans le groupe de patients% vs% du groupe témoin; Quatre pour cent des patients avaient des professions impliquant la manipulation des aliments,% des travailleurs de la santé et% des travailleurs des services de garde. Zone d’origine probable de la maladie Parmi les patients,% avaient voyagé dans des pays autres que la Suède au cours des dernières semaines. , comparativement à seulement% des sujets témoins Un autre% des patients et% des sujets témoins avaient voyagé dans des pays autres que la Suède plus tôt dans l’année précédente. La plupart des voyageurs ont contracté leurs infections en Asie%, Afrique%, Europe du Sud%, ou Amérique latine% des voyageurs,% voyageaient dans des pays autres que la Suède pour seulement des semaines, et% voyageaient dans des pays autres que la Suède pour & gt; année Le% de tourisme, le% de travail et le% d’étude étaient les raisons les plus courantes de voyager La fréquence des isolements d’entéropathogènes par rapport aux zones d’infection est montrée dans le tableau

Tableau View largeTélécharger slideInteropathogènes isolés des selles des adultes atteints d’entérite, en fonction des destinations de voyageTable View largeTélécharger slideEnteropathogènes isolés des selles d’adultes atteints d’entérite, en rapport avec les destinations de voyageMicrobiological results Des patients qui ont subi un examen de laboratoire complet,% ont été trouvés excréter les entéropathogènes potentiels Ce chiffre était légèrement plus élevé chez les patients qui se sont présentés dans la semaine suivant l’apparition de la diarrhée%; pour les voyageurs,% entéropathogènes multiples ont été trouvés dans% des patients:% eu entéropathogènes, et% avaient entéropathogènes simples ont été trouvés dans% du tableau des sujets témoins Résultats microbiologiques pour les patients et les sujets témoins sont présentés dans le tableau Dans l’ensemble, les pathogènes viraux ont été trouvés dans % des patients, pathogènes bactériens en%, et pathogènes protozoaires en%, y compris les agents pathogènes mixtes Campylobacter et C difficile étaient les agents pathogènes les plus communs, trouvés dans% des patients. Parmi les échantillons positifs pour C difficile,% étaient positifs à la fois détection de la cytotoxine B dans les fèces,% seulement par détection de la cytotoxine B dans les fèces, et% seulement par isolement des souches toxigènes Les sérotypes de Salmonella les plus communs étaient Salmonella enteritidis% et Salmonella typhimurium% des isolats de Shigella, les espèces les plus fréquentes étaient Shigella sonnei [%] et Shigella flexneri [%]

Tableau View largeTélécharger slidePotentiels agents entéropathogènes chez les adultes atteints d’entérite et chez les sujets témoinsTable View largeTélécharger la lamePerspectives des agents entéropathogènes chez les adultes atteints d’entérite et chez les sujets témoinsSi des échantillons positifs pour ETEC par PCR,% étaient positifs uniquement pour ESTA,% pour eltB seulement et% pour les deux gènes La distribution des destinations était similaire entre les patients avec des échantillons positifs pour estA et ceux avec des échantillons positifs pour eltB données non montrées Dans les échantillons, les souches E coli correspondantes étaient isolées Seize des patients ETEC positifs étaient également infectés par d’autres agents pathogènes bactériens: Campylobacter, Plesiomonas shigelloides, Salmonella et Shigella En aucun cas, les agents pathogènes concomitants isolés n’étaient positifs pour l’ESTA ou l’eltB par des données de PCR non présentées. L’infection par VTEC a été observée chez des patients; des échantillons étaient positifs pour le gène vt et pour le gène vt; étaient positifs pour le gène eaeA Des souches d’E. coli positives à la vérotoxine ont été isolées chez les patients Quatre des isolats appartenaient au sérogroupe O: HEleven a eu des échantillons fécaux positifs pour le gène ial par PCR à l’exclusion des patients chez lesquels Shigella a été isolé. Parmi les échantillons positifs à l’EPEC, la souche E coli correspondante a été isolée. Les taux d’identification des adénovirus, astrovirus, calicivirus et rotavirus étaient respectivement de%,%,% et%. Tableau Un patient avait de nombreuses spores de microsporidies dans Ses échantillons fécaux Il était séronégatif et ne présentait aucun autre signe d’immunodéficience Aucune bactérie de l’espèce Cyclospora n’a été détectéeBactériémie observée chez% des patients atteints de salmonellose Ces patients ne présentaient pas de différence entre les patients non-bactériémiques et les sujets témoins. et% d’excrétion de C difficile ETEC incluant les isolats et les isolats de VTEC y compris les isolats ont été notés en% et % des sujets témoins, respectivement Tableau Aucune des souches VTEC isolées des sujets témoins n’appartenait au sérogroupe O: H Quatre% des sujets témoins infectés par ETEC et% des sujets témoins infectés par VTEC avaient voyagé dans des pays autres que la Suède au cours de l’année précédente Aucun virus n’a été détecté dans les échantillons des sujets témoins. Manifestations cliniques à l’admission Parmi les patients,% ont visité l’hôpital dans la semaine suivant l’apparition de la maladie, et% ont été malades pour & gt; semaines des patients hospitalisés,% ont été âgés & gt; Les antibiotiques les plus couramment utilisés par les patients infectés par le C difficile étaient les céphalosporines, la clindamycine, les quinolones et les pénicillines d’isoxazolyle. qui étaient positifs pour le C difficile,% n’avaient pas reçu de traitement antibiotique au cours du mois précédent Trente-neuf pour cent des patients infectés par le C difficile étaient âgés de +; Les relations entre les symptômes intestinaux et les pathogènes identifiés dans les selles sont présentées dans le tableau Diarrhée intense, définie par & gt; les selles par jour, ont été observées le plus souvent chez les patients infectés par Salmonella et Campylobacter% et%, respectivement, vs% pour tous les patients; P = vomissements était le plus important chez les patients présentant des infections virales%, vs% parmi tous les patients; P = Il y avait significativement plus de cas de fièvre chez les patients infectés par Salmonella P = et Campylobacter P = et significativement moins de cas de fièvre chez les patients infectés par ETEC P = que chez tous les patients Tableau Aucun patient en choc circulatoire au moment de l’admission des patients infectés par le VTEC ont développé un syndrome hémolytique et urémique

Tableau View largeTélécharger diapositivesCaractères et caractéristiques des adultes atteints d’entérite en rapport avec les agents pathogènes identifiés dans les selles infections mélangées excluesTable View largeTélécharger diapositivesCaractères et caractéristiques des adultes atteints d’entérite par rapport aux agents pathogènes identifiés dans les selles infections mixtes excluesTreatment et évolution de la maladie Trente-huit pour cent des patients ont reçu un traitement antibiotique pour leur maladie diarrhéique Quinolones ciprofloxacine ou norfloxacine ont été prescrits à% des patients atteints de salmonellose et% des patients atteints de shigellose Erythromycine ou quinolones ont été prescrits à% des patients atteints de campylobactériose Le métronidazole ou la vancomycine a été prescrit à% des patients diarrhée associée au C difficile metronidazole à% et vancomycine à%, et tinidazole ou métronidazole a été prescrit à tous les patients atteints de giardiase Quarante-trois pour cent des patients ont reçu un traitement par fluide iv La durée médiane de la diarrhée chez% des patients qui ont répondu d cette question dans le questionnaire de suivi était jours jours, jours, et le nombre médian de jours perdus du travail ou les pensionnaires exclus étaient La durée de la diarrhée avait tendance à être plus longue chez les patients atteints de giardiase et plus courte chez les patients atteints d’infections virales, par rapport au groupe de patients restants Tableau Parmi les patients souffrant de diarrhée associée au C difficile,% avaient ≥ récidives L’arthrite réactive / arthralgie était observée chez% de tous les patients Tableau Aucune autre complication extra-intestinale n’a été rapportée, à l’exclusion des salmonelloses bactériennes chez les patients. patient est mort de la maladie diarrhéique

Tableau View largeDownload slideDurée de la diarrhée chez les adultes atteints d’entérite liée aux pathogènes identifiés dans les selles infections mixtes excluesTable View largeTélécharger DiapositiveDurée de la diarrhée chez les patients adultes atteints d’entérite liée aux pathogènes identifiés dans les selles infections mixtes excluesPour les patients%, causes alternatives de diarrhée ont été diagnostiqués; par exemple, les maladies inflammatoires de l’intestin, la pneumonie, la septicémie, les troubles endocriniens et les effets secondaires des médicaments

Discussion

Ces bactéries sont les plus courantes chez les enfants et dans le monde en développement L’importance de l’E. coli diarrhéique chez les patients souffrant de diarrhée du voyageur a récemment été signalée. Ces dernières années, une augmentation du nombre de cas de E. coli O vérotoxinogène: Des infections à H ont été observées en Suède, principalement chez des enfants dans le sud-ouest du pays. Approximativement, des cas ont été signalés annuellement pendant -, alors que seuls des cas occasionnels ont été signalés auparavant. L’étude actuelle, réalisée dans la partie orientale du pays, n’a atteint que% et aucun cas de syndrome hémolytique et urémique n’a été observé. La découverte d’une infection massive à microsporidies chez un patient souffrant de diarrhée chronique était inattendue, bien que quelques infections microsporidiques aient été observées chez des individus immunocompétents rapporté , les organismes ont principalement été impliqués dans la diarrhée persistante chez les patients infectés par le VIH Cryptosporidium a été identifié chez les patients Cryptosporidium a également été précédemment signalé comme une cause de diarrhée du voyageur La causalité entre les résultats des entéropathogènes et les symptômes n’est pas toujours claire Blastocystis hominis a été trouvé deux fois plus souvent chez les sujets témoins en bonne santé et les souches non pathogènes de ce protozoaire existent probablement comme les souches E histolytica / E dispar , mais malheureusement il n’y a toujours pas d’outils simples pour distinguer les souches virulentes et non virulentes. Trente-huit pour cent des patients ont été traités avec des antibiotiques pour leur maladie diarrhéique. Ce chiffre semble élevé car le traitement antibiotique de l’entérite bactérienne en général n’a que des effets marginaux sur la durée et l’intensité de la diarrhée. De plus, un traitement généreux entraîne une augmentation des souches résistantes les plus évidentes avec les quinolones pour les infections à campylobacter. une durée de transport accrue comme pour Salmonella La raison de le taux de prescription élevé dans la présente étude pourrait être que de nombreux patients étaient gravement malades, ce qui se reflétait aussi dans le fait que jusqu’à% des patients avaient besoin de réhydratation iv. Les échantillons de% des patients ayant reçu des antibiotiques pendant les semaines précédant le début du traitement. la diarrhée était positive pour C difficile Comme dans d’autres études, la plupart de ces patients étaient âgés de & gt; ans Quarante-deux pour cent des patients infectés par le C difficile n’ont cependant pas reçu d’antibiotiques au cours du mois précédent. Ce chiffre est élevé mais peut probablement s’expliquer par la perturbation de la flore colique normale dans les conditions diarrhéiques. conditions de germination du C difficile Un test positif au C difficile pourrait donc dans bien des cas refléter seulement le portage et non la causalité. Un pour cent du groupe témoin était positif au C difficile, ce qui est en accord avec les résultats d’autres études sur des adultes en bonne santé. Parmi les volontaires sains, le taux de portage du C difficile a augmenté à% après avoir reçu les céphalosporines La plupart des patients étaient en relativement bon état à l’admission, bien que ~% Ont eu besoin d’une thérapie avec des fluides iv Les hémocultures étaient positives dans% des cas impliquant Salmonella, ce qui était attendu Non d’autres complications extraintestinales ont été notées, et les études actuelles et précédentes vérifient que la gastro-entérite n’est généralement pas une maladie sévère chez les adultes dans les pays développés La durée médiane de la diarrhée était étonnamment longue, et autant de patients présentaient des symptômes. & gt; Certains patients auparavant en bonne santé, après avoir voyagé dans d’autres pays que la Suède, ont eu une diarrhée persistante pendant plusieurs semaines à plusieurs mois. Quelques études ont traité de ce phénomène mais aucun pathogène spécifique, à l’exclusion des protozoaires, n’a pu être corrélé. symptômes récurrents Une affection évocatrice du syndrome du côlon irritable a été décrite comme survenant après certaines infections, par exemple les infections à salmonelles En résumé, les infections entériques chez les adultes sont des problèmes courants dans les pays développés, bien que l’évolution clinique soit légère. Infections dans les pays en développement Malgré des recherches approfondies en laboratoire, des entéropathogènes ont été détectés chez seulement% de cette population de patients adultes atteints de diarrhée. Les caractéristiques cliniques n’ont pas aidé à prédire l’étiologie des cas individuels. le rendement diagnostique Recommandations générales pour une Les progrès dans le domaine des techniques d’analyse moléculaire conduiront probablement dans un proche avenir à l’ajout de nouveaux micro-organismes à la liste déjà longue d’agents potentiellement entéropathogènes.